Как была создана транспортная среда Эймса (AMIES)

Транспортные среды широко используются в лабораторной практике. Они дают возможность получить надежные результаты даже в условиях длительного хранения и транспортировки биопроб. Для понимания принципов работы широкоизвестной транспортной среды Эймса (Amies) мы предлагаем Вам ознакомиться с ее физико-химическими характеристиками.

Правильный забор и транспортировка микроорганизмов критично важны для их восстановления и определения в культуре при последующем посеве. Если патогенные микробы погибают на преаналитическом этапе исследований, достоверность анализов падает, что сильно искажает их результаты. Для поддержания жизнеспособности чувствительных микроорганизмов (например, рода Neisseria) после их забора до лаборатории Стюартом была разработана одноименная транспортная питательная среда. После ее модификации Эймсом этот состав стал одним из самых широко используемых сегодня.

Классическая формула Стюарта

Г/л

Модифицированный состав Эймса

Г/л

Глицерофосфат натрия

10.0

Na₂HPO₄

1.15

 

 

KH₂PO₄

0.2

Тиогликолят натрия

0.5

Тиогликолят натрия

1.0

CaCl₂

0.1

CaCl₂

0.1

Агар

3.0

Агар

5.0

Цистеин HCl

0.5

 

 

 

 

NaCl

3.0

 

 

КСl

0.2

 

 

MgCl₂

0.1

Метиленовый синий

0.001

Активированный уголь

10.0

pH 7.4 ± 0.2 при 25°C

 

рH 7.2 ± 0.2 при 25°C

 

 

Главное отличие среды Эймса от оригинальной среды Стюарта состоит в том, что глицерофосфат был заменен неорганическим фосфатным буфером. Из-за того, что колиформные организмы и некоторые другие грамотрицательные палочки метаболизируют глицерофосфат в среде Стюарта, их количество в бакпосевах из ран, горла, фекальных образцов увеличивалось, что искажало количественные результаты анализов.

Также Эймсом было показано, что для поддержки жизнеспособности штаммов Neisseria gonorrhoeae концентрация NaCl 0,3 г/л является оптимальной. Ионы Са2+ и Mg2+ были добавлены в состав среды, так как считается, что они регулируют проницаемость клеточной стенки бактерий и таким образом влияют на их выживаемость.

Стюарт обнаружил, что выживаемость Neisseria gonorrhoeae резко увеличивалась при взятии мазков палочками с углем. Проблема была в том, что из-за черной угольной пыли они не пользовались популярностью среди пациентов. Эймс предложил оригинальное решение: добавить активированный уголь непосредственно в транспортную среду.

Выживаемость N. gonorrhoeae при 22°C [1] вне среды:

85 штаммов

С углем

Без угля

Время

К-во выживших штаммов

К-во выживших штаммов

24 часов

82

20

48 часов

70

0

72 часов

38

0

и в транспортных средах:

100 штаммов

Среда Стюарта

Среда Amies

Time

К-во выживших штаммов

К-во выживших штаммов

24 часов

91

98

48 часов

79

87

72 часов

56

77

 

Активированный уголь благодаря большой удельной поверхности обладает высокой адсорбционной способностью. Таким образом, роль угля в высокой выживаемости бактерий в среде Эймса состоит в адсорбции молекул веществ, токсичных для микроорганизмов.

Концентрация агара в среде Эймса была немного увеличена по сравнению с классической формулой среды Стюарта, поскольку присутствие частиц угля негативно влияло на гелеобразующие свойства агара. Также из-за наличия угля Эймс убрал из оригинального состава транспортной среды метиленовый синий, который раньше использовался в качестве редокс-индикатора.

В итоге, во многих исследованиях было показано высокую эффективность использования транспортной среды Стюарта с модификациями Эймса для поддержания даже таких прихотливых микроорганизмов как Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes and Corynebacterium diphtheriae [2, 3].

Сегодня на украинском рынке выбор транспортных сред достаточно широкий. Мы предлагаем Вам серию заметок, которые помогут Вам лучше разобраться в особенностях их состава и применения. Если же у Вас возникают вопросы, касающиеся использования транспортных сред, квалифицированные специалисты компании Sente-Lab будут рады Вам помочь.

 

+38 (067) 401-40-96

menedger3@sente-lab.com

 

Ссылки:

1. Amies C. R. A modified formula for the preparation of Stuart's transport medium //Canadian Journal of Public Health/Revue Canadienne de Sante'e Publique. – 1967. – P. 296-300.

2.Barry A. L., Fay G. D., Sauer R. L. Efficiency of a transport medium for the recovery of aerobic and anaerobic bacteria from applicator swabs //Applied microbiology. – 1972. – Vol. 24. – №. 1. – P. 31-33.

3.Bartlett J. G. et al. Anaerobes survive in clinical specimens despite delayed processing //Journal of clinical microbiology. – 1976. – Vol.. 3. – №. 2. – P. 133-136.