Бактериологические исследования

                  

 

 

Бактериологическое исследование —  предназначенное для выделения бактерий и изучения их свойств с целью постановки микробиологического диагноза.
Исследуемый материал следует брать в асептических условиях в стерильную посуду и доставлять в лабораторию как можно скорее. В случае необходимости пробы следует хранить на холоде. Методика взятия проб зависит от объекта, характера заболевания и свойств микроорганизма. Одним из распространенных приемов бактериологического исследования является бактериоскопия.
Для изучения нефиксированных бактерий пользуются двумя методами: раздавленной (между предметным и покровным стеклами) капли и висячей капли. Следует помнить, что препараты нефиксированных бактерий заразны.
К числу важнейших элементов бактериологического исследования относятся посевы и пересевы бактериальных культур, производимые бактериальной петлей или пастеровской пипеткой. Петлю стерилизуют прокаливанием в пламени, затем ее остужают прикосновением к участку незасеянного агара или ополаскивая в стерильной жидкости. При использовании пастеровской пипетки ее кончик обламывают пинцетом, несколько раз проносят пипетку через пламя горелки и дают остыть. При посевах используют жидкие и твердые питательные среды. При посеве на скошенный агар культуру бактерий растирают петлей по поверхности агара. При посеве в толщу агарового или желатинового столбика питательную среду прокалывают до дна пробирки петлей или особой иглой. При посеве в жидкую среду надо следить, чтобы жидкость не выливалась и не смачивала края пробирок и пробки. Посевы и пересевы следует проводить вблизи пламени газовой горелки, пробирки не должны долго оставаться открытыми, петля или пастеровская пипетка с культурой не должна ни к чему прикасаться; перед тем как закрывать пробирку, края ее следует прожечь. Засеянные пробирки необходимо тотчас же надписать. 

Микробиологические методы исследования делятся на методы прямого обнаружения возбудителя в организме больного — бактериоскопическое и бактериологическое исследования; методы косвенного доказательства наличия возбудителя в организме больного — серологические исследования, направленные на обнаружение специфических антигенов в инфицированном материале или антител в сыворотке крови и различных секретах организма больного.
Бактериоскопическое исследование крови, мочи, спинномозговой жидкости, слизи из зева и носа, кала и различных патологических субстратов на присутствие возбудителя применяют при многих инфекционных болезнях. Этот метод имеет довольно ограниченное применение, хотя и очень важен. Он используется, в частности, для обнаружения в крови возбудителей малярии, возвратного тифа, лептоспироза. Спинномозговую жидкость исследуют при гнойном и туберкулезном менингите, слизь из зева и носа — при дифтерии, ангине Венсана, кал — при амебиазе, балантидиазе, лямблиозе; мочу — при лептоспирозе. Палочки чумы, сибирской язвы можно увидеть в пунктате чумного бубона и мазках-отпечатках, взятых из сибиреязвенного карбункула; при микроскопии мазка пунктата из костного мозга и селезенки, грануляций из язвы можно обнаружить лейшмании; в мокроте — микобактерии туберкулеза. Преимущество бактериоскопического метода заключается в его быстроте. Результаты анализа могут быть получены через несколько часов. При некоторых заболеваниях (малярия, эпидемический цереброспинальный менингит и др.) возбудители могут быть обнаружены в организме больного уже в 1-й день болезни, что очень важно для своевременной диагностики и лечения. Значительно расширились возможности, бактериоскопической диагностики благодаря обработке препаратов специфическими сыворотками, содержащими антитела к данному возбудителю, меченные флуорохромами (иммунофлуоресцентный метод) или ферментами (иммуноферментный метод). При этом меченые антитела соединяются с антигеном, который выявляется при иммунофлуоресцентном методе под люминесцентным микроскопом, а при иммуноферментном методе — по окрашиванию продукта ферментативной реакции после введения субстратно-индикаторной смеси.
Бактериологический метод диагностики основан на выделении возбудителя из крови, спинномозговой жидкости, мокроты, слизи из зева и носа, кала, мочи, желчи больного, а при летальных исходах — из кусочков органов, которые засевают на специальные питательные среды. Бактериологическая диагностика широко используется для исследования слизи из зева и носа на дифтерийные бактерии, для выделения возбудителей кишечных инфекций (например, холеры, дизентерии, сальмонеллезов, эшерихиозов) из кала больного, возбудителей пневмонии - из мокроты и в других случаях. При этом учитывают особенности предполагаемой инфекции, место избирательной локализации возбудителя и пути его выделения в окружающую среду. Исследование дает положительные результаты уже в первые часы или дни болезни. Однако окончательный ответ лаборатория при большинстве инфекционных болезней сообщает лишь через 2-4 дня, а при бруцеллезе, туберкулезе - через 3-4 недель. Это зависит от сроков, требующихся для роста микроорганизмов и их идентификации (биохимической и серологической). Каждый микроб для своего роста требует соответствующей питательной среды. В зависимости от того, какой микроб предполагают выделить (что определяется при клиническом и эпидемиологическом обследовании больного), выбирают соответствующую питательную среду. Иногда посев производят одновременно на несколько питательных сред. Ценность результатов бактериологических исследований во многом определяется тем, правильно ли взят материал у больного и правильно ли он доставлен в лабораторию. Инфекционный материал собирают в стерильную посуду, соблюдая правила асептики.

 Важнейшим этапом бактериологического исследования является идентификация - определение видовой или типовой принадлежности бактерий, полученных в виде чистой культуры. При идентификации бактерий производится изучение их физиологических и биохимических свойств, токсинообразования. Широко используют серологические методы идентификации   бактерий. Во многих случаях эффективным оказывается биологический метод идентификации микроорганизмов, основанный на заражении лабораторных животных исследуемым материалом или полученной культурой бактерий и выявлении у животных характерных патологических изменений.
Для выделения чистых культур используют механические и биологические методы. Пример механического метода: каплю исследуемого материала растирают одним и тем же стерильным шпателем или бактериальной петлей по поверхности плотной питательной среды, последовательно в первой, второй и третьей чашках Петри. Выделение чистой культуры производится из выросших отдельных колоний и заключается в их исследовании и отсеве на свежую питательную среду. Биологические методы выделения чистых культур основаны на учете того или иного свойства выделяемого микроба, отличающего его от других микробов, находящихся в исследуемом материале.
При биологическом методе используют такого рода питательные среды, в которых созданы условия, благоприятные для развития определенного вида микробов. К числу биологических методов относится также заражение лабораторных животных, чувствительных к выделяемому виду бактерий.
Бактериологическое исследование - комплекс методов для выявления патогенных микроорганизмов у больного, у носителя или на объектах внешней среды. 

Методы бактериологического исследования все шире внедряются в практику для более детального обследования больных, установления этиологического фактора воспалительного процесса, назначения рациональной терапии и определения ее эффективности. 

Разнообразие клинического материала и своеобразие микрофлоры отдельных органов определяют особенности методов бактериологического исследования, которые требуют применения специальных приемов отбора проб, посевов на питательные среды и проведения хода анализов. 

Бактериологическое исследование клинического материала состоит из нескольких этапов: 

- отбор проб на исследование; 

- посев на питательные среды; 

- выделение чистой культуры; 

- идентификация и дифференциация выделенных культур микроорганизмов; 

- анализ результатов исследования. 

Методы бактериологического исследования все шире внедряются в практику для более детального обследования больных, установления этиологического фактора воспалительного процесса, назначения рациональной терапии и определения ее эффективности. 

Разнообразие клинического материала и своеобразие микрофлоры отдельных органов определяют особенности методов бактериологического исследования, которые требуют применения специальных приемов отбора проб, посевов на питательные среды и проведения хода анализов. 

Бактериологическое исследование клинического материала состоит из нескольких этапов: 

- отбор проб на исследование; 

- посев на питательные среды; 

- выделение чистой культуры; 

- идентификация и дифференциация выделенных культур микроорганизмов; 

- анализ результатов исследования. 

При бактериологическом исследовании проводят так называемый посев собранного у больного материала на питательные среды, что способствует росту и размножению возбудителя заболевания. В ходе исследования можно выявить не только сам факт наличия, но и концентрацию патогенных микроорганизмов в том или ином биоматериале.
Методом бактериологического исследования исследуют мокроту, ликвор, кровь, а также отделяемое из половых органов, ротовой полости, зева и ран пациента. Таким образом, микроорганизмы можно высевать практически с любого участка организма человека.
Методика бактериологического посева чрезвычайно удобна и эффективна для обнаружения и определения вида бактерий и грибков. Определенную сложность представляет обнаружение вирусов в связи с особенностями их биологии.
Бактериологическое исследование (посевы) имеет огромное значение не только для определения конкретного типа микроорганизма, но и установления степени чувствительности к нему того или иного антибиотика. Таким образом, определяется максимальная эффективность того или иного вида антибиотикотерапии.
При проведении анализа важно помнить, что некоторые микроорганизмы, например пневмококки, довольно быстро погибают, поскольку имеют повышенную тенденцию к саморазрушению. Таким образом, посевы необходимо делать в короткие сроки.